产品货号:
ALH369
中文名称:
蛋白PAGE胶制备试剂盒
英文名称:
Universal protein gel preparation kit
产品规格:
20T|60T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品采用优化的预混合配方和通用分离/浓缩胶配制缓冲液,分离胶/浓缩胶可以同时一次配制完成。因此极大程度上简化了凝胶制备的操作流程,降低了实验人员接触剧毒试剂的机率。只需要一个凝胶制备系统,一小时内可以快速、方便、安全、稳定的配制出各种浓度的高质量的SDS-聚丙烯酰胺凝胶,适用于各个实验室的蛋白电泳和制胶设备,比预制胶更加灵活、经济。
组分 | 20T | 60T |
4×PAGE buffer | 35mL | 105mL |
Acr-Bis solution | 40mL | 120mL |
APS | 1mL | 3mL |
TEMED | 100μL | 300μL |
保存:2~8℃,有效期1年。
APS粉末收到后短期可置于4℃,第一次使用前分别需要加入加0.9mL和2.7mL纯水,混匀配成10%溶液,4℃可以保存一周。如长期使用,请分装后-20℃保存。
- 蛋白凝胶制作中的某些成分有毒性,如丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺,因此制胶过程中必须带手套。
- APS(过硫酸铵)溶液容易失活,短时间一周内使用可置于4℃冰箱,长期保存,可分装成小份置于-20℃保存。每次使用后放回-20℃保存。每小份使用几次后可丢弃。
- 如果凝胶时间明显延长,或者胶不凝固,或者凝固不完全,极有可能是APS失活导致,您可以尝试更换APS解决问题。
- 如果凝胶因为种种未知原因不凝固,也可以尝试APS用量加倍,或者APS和TEMED用量加倍,并可放置于更高温度37℃~45℃促进凝固。
- 建议配胶条件(以两块MiniGel配制10mL体系为例)
成分 分离胶 浓缩胶 6% 8% 10% 12% Acr-Bis solution 2mL 2.67mL 3.33mL 4mL 0.67mL 4×PAGE Buffer 2.5mL 1mL H2O 5.5mL 4.83mL 4.17mL 3.5mL 2.3mL APS 50μL 30μL TEMED 5μL 5μL - 配制不同浓度的分离胶只需要调整Acr-Bis的用量并相应的增加减少H20的用量即可,使终体积依旧保持在10mL。可按照以下公式计算:配制Y%浓度胶需要的Acr-Bis=[(Y%*10mL)/30%] ml,12%浓度胶需要的Acr-Bis solution=[(12% *10mL)/30%] ml=4mL;配制Y%浓度胶需要补足用水量(H20)=10mL~2.5mL- [(Y% *10mL)/30%] mL,12%浓度胶需要的补足用水量(H20)=10mL~2.5mL[(12% *10mL)/30%] mL=10mL~2.5mL~4mL=3.5mL。
- 浓缩胶和分离胶使用相同的4×PAGE Buffer通用分离/浓缩胶配制缓冲液),因此配制时用的成分完全一致,只是体积不同。
- 配制不同浓度的分离胶只需要调整Acr-Bis的用量并相应的增加减少H20的用量即可,使终体积依旧保持在10mL。可按照以下公式计算:配制Y%浓度胶需要的Acr-Bis=[(Y%*10mL)/30%] ml,12%浓度胶需要的Acr-Bis solution=[(12% *10mL)/30%] ml=4mL;配制Y%浓度胶需要补足用水量(H20)=10mL~2.5mL- [(Y% *10mL)/30%] mL,12%浓度胶需要的补足用水量(H20)=10mL~2.5mL[(12% *10mL)/30%] mL=10mL~2.5mL~4mL=3.5mL。
- 准备两个洁净的小烧杯(分离胶和浓缩胶各用一个烧杯,同时准备),按照上表将分离胶/浓缩胶的前三个组分(APS和TEMED不加)依次分别加入小烧杯内(分离胶和浓缩胶同时准备,所需成分相同,只是吸取体积不同,因此吸取相同溶液时不用更换枪头),分别混匀,封口膜封好装浓缩胶混合液的小烧杯口4℃冰箱保存备用。
- 装分离胶混合液的小烧杯内再加入APS和TEMED,以枪头搅拌约10~20sec混匀,灌胶后立即再在胶面上小心地铺上一几毫米厚的水层(这可使凝固后的胶面平滑整齐),然后于室温凝固30~40min(37℃可提高凝胶速度)。室温较低时候凝固所需时间会延长。
- 当能轻易观察到因固液相折光率不同形成的细线时,表明胶体充分凝聚。此时倒出蒸馏水,尽量吸干残余液体。
- 从冰箱取出备用的装有浓缩胶混合液的小烧杯,加入APS和TEMED,枪头搅拌均匀,灌胶后插入梳子,然后于室温或者37℃凝固15~30min。凝固的胶连带其附着的玻璃板用塑料薄膜严密包裹可在4℃冰箱保存2~4天,长时间保存易干胶,要重新做胶。
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